转基因动物制备;胚胎冷冻保存;新进品系净化移植
发布时间:2019-07-08
- 转基因小鼠制备
- 小鼠胚胎冷冻保存
- 小鼠冻存胚胎复苏
- 小鼠生物净化
- 附表下载
- 联系人:李莉(lili@ion.ac.cn)
1. 转基因小鼠制备
1.1要求:
- 注射片段最好以粘性末端酶切,并注明片段的大小
- 如无特殊要求,默认B6D2F1为制作转基因的背景品系,如有特殊品系要求,请注明
1.2流程:
- 填写转基因小鼠制备表
- 将注射用转基因片段标准化回收
- 显微注射
- 胚胎移植
- 待小鼠出生10-14天,通知相关研究组取组织鉴定(要求在1周内完成鉴定工作)
- 研究组及时反馈鉴定信息
- 根据鉴定结果淘汰阴性小鼠,保留转基因阳性Founder鼠并待该小鼠断奶后交给研究组
- 接收小鼠者签名确认
2. 小鼠胚胎冷冻保存
2.1. 要求
- 提供冻存用配种♂鼠必须PCR鉴定确认为阳性转基因或基因敲除小鼠
- 提供冻存用配种♂鼠年龄需达到10周龄以上,6月龄以下,并有成功配种经历为优选。♀鼠年龄在4-5周龄。
- 提供冻存用配种♂鼠数量需在6只以上。
- 提供冻存用小鼠微生物指标必须符合SPF级标准。
2.2. 流程
- 填写小鼠胚胎冻存申请表
- 填写小鼠档案表
- 通知小鼠送达时间
- 核对小鼠信息
- 胚胎冻存
- 胚胎冻存结束,通知研究组管理员,按研究组要求处理小鼠
3. 小鼠冻存胚胎复苏
3.1 流程:
- 填写小鼠胚胎复苏申请表
- 胚胎复苏、胚胎移植
- 待小鼠出生10-14天通知相关研究组取组织鉴定(要求在1周内完成鉴定工作)
- 研究组及时反馈鉴定信息
- 根据鉴定结果淘汰阴性小鼠,保留阳性小鼠并待该小鼠断奶后交给研究组
- 根据复苏胚胎的数量通知研究组是否需要补充冻存胚胎。
4. 小鼠生物净化
4.1 要求:
- 提供净化用配种♂鼠必须PCR鉴定确认为阳性转基因或基因敲除小鼠
- 生物净化一般只需提供配种♂鼠,如有特殊需要,可提供同品系♀鼠用于超排。
- 提供净化用配种♂鼠年龄需达到10周龄以上,6月龄以下,健康,并有成功配种经历为优选。♀鼠年龄在4-5周龄,健康。
- 提供净化用配种♂鼠数量需在2只以上。(如只有1只公鼠,需要繁殖一代,得到满足数量要求阳性小鼠后再申请净化)
4.2 流程:
- 填写小鼠生物净化申请表
- 按通知时间将小鼠放置指定地点及位置
- 胚胎移植净化升级
- 待小鼠出生10-14天通知相关研究组取组织鉴定(要求在1周内完成鉴定工作)
- 研究组及时反馈鉴定信息及小鼠用途给动物房小鼠管理员
- 根据鉴定结果淘汰阴性小鼠,保留阳性小鼠并待该小鼠断奶后交给研究组
- 研究组及时处理污染小鼠

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