常规透射电镜生物样品制备步骤

发布时间:2019-06-19

一.取材:
组织块小于1立方毫米

二.固定:        
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次
1%锇酸固定液固定                2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗         15分 三次

三.脱水:        
50%乙醇                        15-20分
70%乙醇                        15-20分
90%乙醇                        15-20分
90%乙醇 90%丙酮(1:1)        15-20分
90%丙酮                        15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮         室温         15-20分三次

四.包埋:        
纯丙酮+包埋液(2:1)室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温 过夜
纯包埋液                 37度 2-3小时

五.固化:        
37度烘箱内                 过夜
45度烘箱内                 12小时
60度烘箱内                 48小时

六.超薄切片机切片70 nm

七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色

八.透射电镜JEOL  JEM-1230(80KV)观察。拍片。
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