一.取材:
组织块小于1立方毫米
二.固定:
2.5%戊二醛,磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
1%锇酸固定液固定 2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗 15分 三次
三.脱水:
50%乙醇 15-20分
70%乙醇 15-20分
90%乙醇 15-20分
90%乙醇 90%丙酮(1:1) 15-20分
90%丙酮 15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮 室温 15-20分三次
四.包埋:
纯丙酮+包埋液(2:1)室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液(1:2)室温 过夜
纯包埋液 37度 2-3小时
五.固化:
37度烘箱内 过夜
45度烘箱内 12小时
60度烘箱内 48小时
六.超薄切片机切片70 nm
七.3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八.透射电镜JEOL JEM-1230(80KV)观察。拍片。